生物学论文发表-《1,2,4-三氯苯降解菌的功能研究》

摘要：关于《1,2,4-三氯苯降解菌的功能研究》的生物学论文发表：以1,2,4-三氯苯为唯一碳源,从天津化工厂氯苯生产车间的土壤中分离到1株1,2,4-三氯苯的降解菌THSL-1.通过形态观察和16S rDNA序列测定,论文格式该 菌株被初步鉴定为施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri).经质粒检测,在菌株THSL-1中发现1条质粒条带,将所获得质粒转化到E.coli.JM109中,转化子能以1,2,4-三氯苯 为唯一碳源生长,且对1,2,4-三氯苯有降解作用.因此,可以认为该质粒携带降解1,2,4-三氯苯的基因.选用HindIII、BamHI、 XholI 3种限制性内切酶分别对质粒pTHSL-1进行单酶切、双酶切,最终确定质粒平均大小为40.2kb.

 

关键词：1,2,4-三氯苯；16S rDNA；降解质粒；假单胞菌

 

1,2,4-三氯苯(1,2,4-TCB)被广泛用作溶剂、杀虫剂等,其具有较高的毒性,进入自然界后易造成残留和富集,产生一系列环境问题.研究 表明[1],在氯苯类化合物中,1,2,4-TCB对肝脏的毒性最大.另外,由于氯原子在苯环上呈较对称的特殊结构,其化学稳定性较强,所以生物降解成为 去除1,2,4-TCB的主要手段[2].已见报道的1,2,4-TCB降解菌主要有Pseudomonas aeruginosa RH01[3]、Pseudomonas sp.strain PS12[4]、Pseudomonas sp.strain P51[5]、Burholderia sp.strain PS14[4]、Dehalococcoides strain CBDB1[6].但大多数工作主要集中在降解菌株的降解能力、降解途径等方面.除1991年荷兰学者Van der Meer[5]报道过110kb三氯苯的降解质粒外,一直没有关于分子水平上三氯苯降解机理的研究报道.作者从天津化工厂的污泥中分离到一株以 1,2,4-三氯苯为唯一碳源的施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri,P.stutzeri)THSL-1,从中发现一个平均大小为40.2kb的新的降解性质粒,并对质粒性质进行了初步研究.

 

1材料与方法

 

1.1试剂与培养基1,2,4-三氯苯(购自上海试剂厂),分析纯.培养基采用LB培养基和无机盐培养基.无机盐培养基组 分:Na2HPO4?2H2O 7g;KH2PO4 2g;(NH4)2SO4 0.5g;MgSO4?7H2O 0.2g;1mL微量元素溶液(主要成分:Ca(NO3)2?4H2O 600mg;CuSO4?5H2O 40mg;FeSO4?7H2O200mg;ZnSO4?7H2O20mg;MnSO4?4H2O20mg;H3BO33mg;NaMoO4?2H2O4mg), 加水至1L,pH 7.0.
1.2菌种富集和分离纯化土壤样品取自天津化工厂氯苯生产车间.样品稀释后直接涂布于含有1,2,4-TCB的LB平 板,30℃培养.待长出菌落后,挑取单菌落在含有高浓度底物的液体培养基中驯化,于30℃,150r/min,摇床振荡培养;经过4~5d驯化后,取 1~2mL菌液涂布于以1,2,4-TCB为唯一碳源的无机盐平板,30℃恒温培养,再从平板中挑选生长较快,个体较大的单菌落接种到以1,2,4- TCB为唯一碳源的液体无机盐培养基中振荡培养;再涂布无机盐平板,恒温培养,如此重复2次,挑取生长旺盛的单菌落进行多次平板划线分离,直至得到单一菌 株.
1.3细菌生长和氯离子浓度测定细菌生长用OD600表示.用离子色谱测定氯离子浓度,在测定之前,样品经过0.45μm微孔滤膜过滤.